檢驗(yàn)科醫(yī)用顯微鏡的觀察方法介紹

檢驗(yàn)科醫(yī)用顯微鏡的觀察方法多種多樣，以適應(yīng)不同樣本和診斷需求。以下是一些常用的觀察方法：

一、明場(chǎng)觀察（Bright Field Observation）

明場(chǎng)觀察是*常見(jiàn)的顯微鏡觀察方式，也是一切光學(xué)顯微鏡的基礎(chǔ)。其主要特點(diǎn)是以染色的標(biāo)本為觀察對(duì)象，利用透射率的變化為基礎(chǔ)。照明光直接通過(guò)聚光鏡射入樣品，并透過(guò)樣品進(jìn)入物鏡*終被觀察到。多用于常規(guī)鏡檢、病理切片、染色標(biāo)本的觀察。其優(yōu)點(diǎn)包括視野亮度高、均勻、應(yīng)用范圍廣泛、操作簡(jiǎn)單；缺點(diǎn)則是對(duì)于透明的標(biāo)本對(duì)比度較低。

二、暗場(chǎng)觀察（Dark Field Observation）

暗場(chǎng)觀察采用暗場(chǎng)照明，與明場(chǎng)觀察的照明方式不同。明場(chǎng)觀察的照明光線是直接進(jìn)入物鏡的，而暗場(chǎng)觀察的照明光線是照亮被檢物品而不直接進(jìn)入物鏡，觀察到的是被檢物品反射或衍射的光線。整個(gè)視場(chǎng)的背景是黑色的，被檢樣品呈現(xiàn)明亮的像，就像在夜空里看星星，因此也被稱(chēng)為超顯微術(shù)。暗場(chǎng)觀察適合觀察微小粒子、細(xì)菌形態(tài)、細(xì)菌計(jì)數(shù)、透明標(biāo)本等，能夠看到標(biāo)本的細(xì)微結(jié)構(gòu)。

三、相差觀察（Phase Contrast Observation）

相差觀察有效地利用光的干涉現(xiàn)象，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿瑥亩乖瓉?lái)透明的物體表現(xiàn)出明顯的明暗差異，對(duì)比度增強(qiáng)，這大大便利了活體細(xì)胞的觀察。該觀察方式主要應(yīng)用在無(wú)色透明的活體標(biāo)本結(jié)構(gòu)，檢查鑒定活體細(xì)胞等。需要注意的是，在該模式下觀察光強(qiáng)要高、切片不能太厚（2~10um），蓋玻片、載片需符合標(biāo)準(zhǔn)，且其熒光效果不如明場(chǎng)物鏡。

四、熒光觀察（Fluorescence Observation）

熒光觀察不是通過(guò)普通光源的照明觀察標(biāo)本，而是利用一定波長(zhǎng)的光（通常是紫外光、藍(lán)紫光、藍(lán)光、綠光）激發(fā)顯微鏡下標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)，使之發(fā)射熒光。熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明，而是作為一種激發(fā)標(biāo)本內(nèi)熒光物質(zhì)的能源。熒光觀察的優(yōu)點(diǎn)包括高特異性（靶向標(biāo)記）、對(duì)細(xì)胞刺激小（可活體染色）、能進(jìn)行多重染色（共定位）。

五、微分干涉觀察（Differential Interference Contrast, DIC）

微分干涉觀察是在相差的基礎(chǔ)上演變而來(lái)的，但其物理原理與相差不同，技術(shù)設(shè)計(jì)比較復(fù)雜。DIC模式多用于觀察無(wú)色透明活體標(biāo)本的形態(tài)輪廓、無(wú)色熒光標(biāo)本、細(xì)微結(jié)構(gòu)、運(yùn)動(dòng)情況觀測(cè)及顯微操作等。其優(yōu)點(diǎn)在于使被檢物體產(chǎn)生三維立體感覺(jué)，觀察效果更直觀；無(wú)須特殊物鏡，與熒光觀察配合更好。但需要注意，雙折射物質(zhì)不能達(dá)到DIC鏡檢效果，而且不能應(yīng)用于塑料容器培養(yǎng)物的觀察。

六、偏光觀察（Polarized Light Observation）

偏光觀察是用于研究透明或不透明各向異性材料的一種顯微鏡觀察方法。具有雙折射的物質(zhì)在偏光顯微鏡下能被看清。該方法的特點(diǎn)是將普通光變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同性）或雙折射（各向異性）。因此，偏光顯微鏡被廣泛應(yīng)用在礦物和化學(xué)等領(lǐng)域，在生物學(xué)和植物學(xué)中也有應(yīng)用。

七、霍夫曼調(diào)制相差觀察（Hoffmann Modulation Contrast, HMC）

霍夫曼調(diào)制相差觀察利用斜射光照射，將相位梯度轉(zhuǎn)變?yōu)楣鈴?qiáng)度變化，這樣可以用來(lái)觀察未經(jīng)染色的樣品和活細(xì)胞。它適用于相位物體、雙折射物體、染色試樣、柱狀物體以及具有表面和次表面特征的物體進(jìn)行高分辨率顯微觀察，可對(duì)細(xì)胞組織、透明液態(tài)組織、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)組織進(jìn)行動(dòng)態(tài)顯微觀察及科研分析。

在實(shí)際操作中，檢驗(yàn)科醫(yī)生或研究人員需要根據(jù)樣本的性質(zhì)和診斷需求選擇合適的觀察方法，并嚴(yán)格按照顯微鏡的操作規(guī)程進(jìn)行操作，以確保觀察結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。